2026, 43(01):185-197.
摘要:
【目的】 通过体内外研究,探讨痫得安丸联用丙戊酸钠对卒中后癫痫的改善作用及机制。【方法】(1)动物实验:采用
单侧大脑中动脉闭塞结合结扎颈总动脉(MCA/CCAo)法复制大鼠缺血性卒中后癫痫模型。将造模成功的40只癫痫大鼠随机分
为模型组、丙戊酸钠组、痫得安丸组、痫+丙联用组,另取10只大鼠仅暴露血管后即原路缝合切口作为假手术组。给药4周
后,记录各组大鼠癫痫发作频率和持续时间,苏木精-伊红(HE)染色法观察海马组织病理学变化,尼氏染色法观察海马组织
尼氏小体情况,检测大脑谷氨酸(Glu)、γ氨基丁酸(GABA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平,实时
定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western Blot 法分别检测海马组织 TNF-α、肿瘤坏死因子受体 1(TNFR1)、核转录因子 κB
(NF-κB)p65、磷酸化 p65(p-p65)、环氧化酶(Cox2)、基质金属蛋白酶 9(MMP9)、原癌基因 Fos(c-Fos)的 mRNA、蛋白表
达。(2)细胞实验:将RAW264.7细胞接种于96孔板,分为空白组、脂多糖(LPS)组、丙戊酸钠组、痫得安丸组、痫+丙联用组,孵育 6 h 后,加入 LPS 培养 24 h。RT-qPCR、Western Blot 法分别检测 RAW264.7 细胞中 IL-1β、TNF- α、TNFR1、
NF-κB p65、p-p65、Cox2、MMP9 的mRNA、蛋白表达。【结果】(1)动物实验:与假手术组比较,模型组大鼠的癫痫发作
次数和持续时间显著升高(P<0.01),海马CA1区的锥体神经元排列紊乱、细胞萎缩、染色加深,尼氏小体数量明显减少,大
鼠大脑 GABA 含量降低,Glu 含量,Glu/GABA 比值,IL-1β、TNF-α 水平升高(P<0.01),海马 TNF-α、TNFR1、NF-κB
p65、Cox2、MMP9、c-Fos 基因表达升高(P<0.01),TNF-α、TNFR1、p-p65、Cox2、MMP9 蛋白表达升高(P<0.05 或 P<
0.01)。痫+丙联用组大鼠癫痫发作频率及持续时间显著降低,海马病理观察可见神经元排列规整性、胞体轮廓清晰度及核质
染色均匀性及尼氏小体数量分布情况明显改善,大脑组织GABA含量升高,Glu含量,Glu/GABA比值,IL-1β、TNF-α水平
降低,海马 TNF-α、TNFR1、NF-κB p65、Cox2、MMP9、c-Fos 基因表达水平升高,海马 TNF-α、TNFR1、p-p65、Cox2、
MMP9蛋白表达水平降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且治疗效果优于丙戊酸钠组或痫得安
丸组(P<0.05 或 P<0.01)。(2)细胞实验:LPS 刺激后各给药组 RAW264.7 细胞 IL-1β、Cox2、MMP9 基因表达及 TNF-α、pp65、Cox2、MMP9蛋白表达均较模型组下降(P<0.05或P<0.01),丙戊酸钠组、痫+丙联用组RAW264.7细胞TNF-α基因表
达较模型组下降(P<0.05),TNFR1蛋白表达较模型组下降(P<0.01),痫+丙联用组细胞MMP9基因及p-p65蛋白表达较丙
戊酸钠组下降(P<0.01),痫+丙联用组细胞TNF-α、TNFR1蛋白表达较痫得安丸组下降(P<0.05)。【结论】 痫得安丸与丙
戊酸钠合用可改善卒中后癫痫大鼠癫痫的发生和神经炎症反应,其机制可能与抑制TNF-α/NF-κB信号通路有关。