2022, 39(2):402-409.
摘要:
【目的】 探讨甘草素对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞放疗敏感性的作用及机制。【方法】 体外培养NSCLC细胞株A549。使用不同浓度甘草素处理,筛选20%抑制浓度(IC20)的甘草素浓度。经甘草素处理后,克隆形成实验观察细胞放疗敏感性,选择半数细胞存活分数(SF)对应的放射线剂量进行后续实验。A549细胞随机分为对照组、甘草素组、miR-21 mimics-NC组、miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组。miR-21 mimics-NC组转染miR-21模拟物阴性对照,miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组转染miR-21模拟物,24 h后观察转染效果,甘草素组、甘草素+miR-21 mimics组加入0.2 mmol/L 甘草素作用24 h、4 Gy 6 MV-X射线照射3 h进行后续实验。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-21、蛋白络氨酸磷酸酶MEG2 mRNA相对表达量;双荧光素酶报告基因实验验证 miR-21 与 MEG2 的靶向关系;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测 MEG2 蛋白相对表达量。【结果】 选取甘草素浓度为0.2 mmol/L,甘草素处理后,A549细胞SF降低(P<0.05),放射增敏比>1。与对照组比较,甘草素组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05),miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05);与甘草素组比较,miR-21 mimics 组、甘草素+miR-21 mimics 组细胞相对活力、miR-21 相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA 和蛋白相对表达量降低(P< 0.05);与miR-21 mimics-NC组比较,miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05);与miR-21 mimics组比较,甘草素+miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-21直接靶向MEG2。【结论】 甘草素可以抑制NSCLC细胞增殖,促进细胞凋亡及增强放疗敏感性,其机制可能与调控miR-21对MEG2转录和翻译的抑制有关。