【目的】 通过观察 microRNA-30d-5p对多囊卵巢综合征（PCOS）卵巢颗粒细胞（GCs）的影响，探讨定坤丹治疗 PCOS的 作用机制。【方法】 以脱氢表雄酮（DHEA）建立PCOS大鼠模型，体外培养正常大鼠GCs与PCOS大鼠GCs。将GCs分为空白组， 模型组及定坤丹低、高剂量组，分组处理后，采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测GCs的存活率，细胞流式术 分析 GCs 凋亡率，实时聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测 GCs 中转化生长因子 β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3 及 microRNA- 30d-5p的表达，Western Blot法检测GCs中TGF-β1、Smad2及Smad3的蛋白表达。【结果】 与空白组比较，模型组GCs存活率 显著下降，GCs 凋亡率，TGF-β1、Smad2 及 Smad3 的基因及蛋白表达水平显著升高，microRNA-30d-5p 的表达水平显著下 降，差异均有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，定坤丹低、高剂量组GCs存活率上升，GCs凋亡率显著下降，TGF-β1、 Smad2及Smad3的基因与蛋白表达水平显著下降，microRNA-30d-5p的表达显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜ 0.01），且呈剂量依赖性。【结论】 定坤丹通过microRNA-30d-5p靶向调节Smad2促进GCs增殖，可能起到治疗PCOS排卵障碍 的作用。

Objective To investigate the therapeutic mechanism of Dingkun Dan（DKD） in polycystic ovary syndrome（PCOS） by examining the effects of microRNA-30d-5p on ovarian granulosa cells（GCs）. Methods A PCOS rat model was established using dehydroepiandrosterone（DHEA）. Normal rat GCs and PCOS rat GCs were cultured in vitro and divided into four groups：blank control group，model group，low-dose DKD group，and high-dose DKD group. After grouping，GCs viability was assessed using the methyl thiazolyl tetrazolium（MTT） assay，GCs apoptosis was analyzed by flow cytometry，and the gene expression of transforming growth factor β1 （TGF- β1）， Smad2， Smad3， and microRNA-30d-5p in GCs was measured by real-time polymerase chain reaction（RT-PCR），protein expression of TGF-β1，Smad2，and Smad3 in GCs was detected by Western Blot. Results Compared with the blank control group，the model group exhibited significantly decreased GCs viability， increased GCs apoptosis， upregulated mRNA and protein expression of TGF- β1， Smad2， and Smad3， and downregulated microRNA-30d-5p expression，the differences were statistically significant（P＜0.01）. Compared with the model group， both low- and high-dose DKD groups showed increased GCs viability， reduced GCs apoptosis，downregulated mRNA and protein levels of TGF-β1 Smad2 and Smad3，elevated microRNA-30d-5p expression， and the differences were statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）. Conclusion DKD promotes GCs proliferation by targeting Smad2 via microRNA-30d-5p，suggesting a potential therapeutic role in PCOSrelated ovulatory dysfunction.

R285.5

国家自然科学基金-青年科学基金项目（编号：82104905）；常州市第十一批科技计划项目（编号：CJ20246018）；江苏省中医药学会 科研项目-振兴发展项目（编号：ZXFZ2024058）；常州市孟河医派人用经验研究与转化重点实验室项目（编号：CM20223006）；南京中医药大学 技术开发项目（编号：2017005）